氧氣是大多數(shù)生命形態(tài)存在的基本要素。對于生命科學(xué)研究人員而言，氧氣是一種電子受體，一種生命所必需的高活性分子，以及一種影響生物中每一個單一活動和反應(yīng)的分子。一般情況下，大氣含氧量被認(rèn)為是21%。

然而，當(dāng)吸入空氣時，組織氧合下降到約5%。從肝至肺上皮中，氧氣水平約為14%，腸粘膜腔實際上是無氧的。在這些百分比中，不同的組織中有不同的氧氣水平，但最重要的是，沒有一個組織的細(xì)胞會暴露在21%的氧氣水平中。事實上，21%的氧氣會形成活性氧自由基(ROS)及其中間體，因此對細(xì)胞具有高毒性。當(dāng)產(chǎn)生的ROS超過細(xì)胞的抗氧化能力時，ROS就開始破壞大分子，如蛋白質(zhì)、脂類和DNA。

缺氧是細(xì)胞和組織通過血流增加、血管舒張或上調(diào)氧應(yīng)答基因?qū)σ欢ǖ难鯕馑阶鞒鲰憫?yīng)，以期維持它們的氧氣水平。這些響應(yīng)會在氧氣水平低于某一特定點后發(fā)生，這個點在各組織和細(xì)胞間各不相同。正常組織在3%到10%的氧氣水平之間得以維持，低于該水平被視為低氧狀態(tài)（最恰當(dāng)?shù)拿枋鍪侨毖酰?/p>

由于是在非生理條件下進(jìn)行研究,因此,在很多，甚至可能是大部分的研究中都要隱藏生理表型。由此，了解各項研究中器官或組織的氧氣水平，以獲得可轉(zhuǎn)移的和生物學(xué)相關(guān)的實驗結(jié)果是很重要的。每個組織和器官都有各自的氧合狀態(tài)，反映了各自的功能。當(dāng)氧氣含量過高或過低時，其影響涉及單基因表達(dá)到蛋白質(zhì)組水平。

圖1. A：Baker Ruskinn OxyGenie移動式孵化器。B：組裝硅細(xì)胞培養(yǎng)孔

樣品室經(jīng)過優(yōu)化，以實現(xiàn)高分辨率成像。樣品室的底座為高質(zhì)量的玻璃蓋。每個樣品都是一個迷你孵化器，配有不同的蓋子和鎖。經(jīng)過優(yōu)化的樣品室可容納1mL的樣品培養(yǎng)基，并以光學(xué)透明玻璃蓋密封。蓋鎖是為了預(yù)防潛在的蒸發(fā)。外蓋鎖將蓋子牢固密封。最后一層外蓋與系統(tǒng)的氣體軟管連接。

圖2：為Coral Life準(zhǔn)備的EM ICE加載區(qū)。

圖3：可見與EM ICE中板接觸的、在藍(lán)寶石盤側(cè)的牙蠟(紅色圈)。

活細(xì)胞可將MTT轉(zhuǎn)化生成甲臜，顏色由黃色變?yōu)樽仙?藍(lán)色，可通過光度計的吸收測量來檢測。去除培養(yǎng)基，用50 μl或500 μl MTT溶液（DMEM中1 mg/ml）對細(xì)胞進(jìn)行染色，在37℃，5%二氧化碳水平中孵育2小時。然后用50 μl或500 μl異丙醇替代染色劑。將溶液轉(zhuǎn)移到96孔板上，在波長范圍560 ~ 650 nm內(nèi)測量吸收。細(xì)胞形態(tài)學(xué)的光學(xué)評估顯示，試驗樣品和對照樣品均為正常的成纖維細(xì)胞，如圖4所示。

結(jié)合形態(tài)學(xué)的評估，Coral Life工作流清楚地顯示，SampLink室作為非常合適的實驗工具，可以在任何活細(xì)胞實驗中，將您感興趣的細(xì)胞保持在特定的生理狀態(tài)。